豬 O 型口蹄疫合成肽結(jié)構(gòu)蛋白 ELISA 抗體檢測試劑盒說明書

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       通用名：豬 O 型口蹄疫合成肽結(jié)構(gòu)蛋白 ELISA 抗體檢測試劑盒（ 英文名：Test Kit for Antibodies to Porcine Foot and Mouth Disease Virus O （ELISA） 【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒 【預(yù)期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus，F(xiàn)MDV）引起的偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，其特征為口腔黏膜、蹄部、乳房皮膚發(fā)生水泡和爛斑。 本試劑用于檢測豬血清中口蹄疫病毒 O 型抗體，可用于口蹄疫病毒 O 型疫苗免疫效果評價。 【原 理】 本試劑盒系由預(yù)包被口蹄疫病毒O型VP1抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測豬血清、血漿樣本中豬口蹄疫病毒O型抗體。實驗時在酶標(biāo)板中加入對照血清和待檢樣本，經(jīng)溫育后若樣品中含有豬口蹄疫病毒O型抗體，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有口蹄疫病毒O型抗體。 【試劑盒組成】 【儲存及有效期】 于 2～8℃避光保存，有效期為 12 個月。 包被板開封后請于 2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為 2 個月。 【適用儀器】 含 450nm、630nm 波長的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。 【樣品準(zhǔn)備】 1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品 1 周內(nèi)可于 2～8℃保存，長期需置-20℃保存。 2.用樣品稀釋液將待檢血清按 40 倍稀釋（如 5μl 血清加入 195μl 樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。 3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作 20 倍稀釋。 【檢驗方法】 1.使用前將試劑盒置室溫 30 分鐘，恢復(fù)至室溫。 2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對照 1 孔、陰性/陽性對照各 2 孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。 3.空白對照孔加樣品稀釋液 100μl；陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照 100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品 100μl。 4.混勻，置 37℃反應(yīng) 30 分鐘。 5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，重復(fù)洗滌 5 次，拍干。 6.每孔加酶標(biāo)記物 100μl（空白孔除外）。置 37℃反應(yīng) 30 分鐘。 7.洗滌，同步驟 5。 8.每孔依次加底物液 A、底物液 B 各 50μl，混勻，37℃避光反應(yīng) 10 分鐘。 9.每孔加終止液 50μl，混勻，于 450nm(可用 630nm 作參比波長）測定各孔吸光值（A 值），無參比波長用空白孔調(diào)零(即所有孔吸光值減去空白孔吸光值)。 【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照≤0.10，陽性對照≥0.6。 【檢驗結(jié)果的解釋】 1.樣品 A 值≥0.38 為陽性；樣品 A 值在 0.2 到 0.38 之間為可疑；樣品 A 值＜0.2 為陰性。 2.本實驗結(jié)果為陰性或可疑時表明豬只抗體水平不足，建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗。 【試驗方法的局限性】 該試驗僅作為定性檢測豬血清、血漿中豬口蹄疫病毒 O 型抗體，根據(jù) A 值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評估。 【注意事項】 1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。 3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。 4.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶，使用時需恢復(fù)至室溫以溶解。 5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。 6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。 7.試驗結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。 8.不同批號試劑組分不得混用。